#关注 | 新冠病毒核酸检测再提速，更需要加强质量控制

发表时间：2021-10-27 16:49
10月24日，国务院联防联控机制召开新闻发布会。国家卫生健康委新闻发言人、宣传司副司长米锋指出：“各地要坚持‘外防输入，内防反弹’的防控策略不动摇，现有的防控措施不放松。”截止10月25日晚，本轮疫情已波及11省份21市旗。

【图片来源：北京日报】

10月25日，国家卫生健康委官网发布《关于进一步强化当前新冠病毒核酸检测服务的通知》，明确要求：

1.所有二级及以上综合医院、传染病专科医院、各级疾控机构等，均应当具备核酸检测能力并提供检测服务。
2.核酸检测机构要向社会提供24小时核酸检测服务；
3.对“愿检尽检”人群的核酸检测，要力争在6小时之内报告结果；
4.鼓励根据检测量，配备新冠病毒核酸快检试剂及配套设备，减少等待时间。



【截图来源：医政医管局】

关于进一步强化当前新冠病毒核酸检测服务的通知


各省、自治区、直辖市及新疆生产建设兵团应对新型冠状病毒肺炎疫情联控联控机制（领导小组、指挥部）：

当前，我国局部地区出现小规模聚集性疫情和零星散发病例，暴露出部分地区核酸检测机构布局不合理、检测服务不够便捷、检测结果反馈不及时等问题。为进一步强化核酸检测服务，从严从紧抓好疫情防控工作，现提出以下工作要求：

一、进一步提高对核酸检测重要性的认识

目前全球疫情仍在扩散并呈现新的特点，多国放松管控、减少出入境人员限制，我国外防输入形势严峻。核酸检测是发现新冠病毒感染者的关键技术手段，对于及时发现传染源、降低疫情扩散风险、落实“早发现”具有重要意义。各地要进一步提高政治站位，落实党中央、国务院决策部署，毫不放松抓好外防输入、内防反弹，以核酸检测为中心扩大预防，进一步加强核酸检测工作的组织部署，服务于疫情防控大局。

二、强化核酸检测机构合理布局

卫生健康行政部门要科学布局核酸检测资源，以设区的市为单位，对核酸检测机构实行网格化设置管理。按照国务院联防联控机制《进一步推进新冠病毒核酸检测能力建设工作方案》要求，所有二级及以上综合医院、传染病专科医院、各级疾控机构等，均应当具备核酸检测能力并提供检测服务。要将所辖区域划分为若干网格，按照就近、就便的原则，统筹好医疗机构、疾控机构、第三方检测机构核酸检测资源，实现区域内、网格内核酸检测服务全覆盖。卫生健康行政部门要通过官方网站、客户端、微信公众号、公共服务小程序等多种方式，向社会公布辖区内所有核酸检测机构名单、工作时间、联系电话、地址等，并及时更新，鼓励开发可视化地图便于群众查询。

三、提供优质高效的核酸检测服务

核酸检测机构要向社会提供24小时核酸检测服务。要加强核酸采样、送检、报告各环节衔接，在保证检测质量的前提下，发挥核酸检测仪器设备最大效能，在规定的反馈时间基础上，进一步缩短核酸检测结果报告时间。特别是对“愿检尽检”人群的核酸检测，要力争在6小时之内报告结果，并通过信息化手段及时向群众推送，鼓励根据检测量，配备新冠病毒核酸快检试剂及配套设备，减少等待时间。

人口流动性强的省会城市、中心城市、口岸城市、旅游城市等，要切实强化核酸检测服务。在落实上述要求的基础上，进一步扩大核酸检测服务供给，方便群众就近就便获得核酸检测服务；同时，确保在规定时间内，及时反馈检测结果，最大程度避免疫情外溢风险。

各地要在近期内对核酸检测工作各项要求落实情况进行再部署、再检查，并将有关情况以省级联防联控机制指挥部或者领导小组的名义于10月29日前报送我组。

国务院应对新型冠状病毒肺炎
疫情联防联控机制医疗救治组

2021年10月22日

参考资料：国家卫生健康委医政医管局《关于进一步强化当前新冠病毒核酸检测服务的通知》


根据通知要求，“在保证检测质量的前提下，发挥核酸检测仪器设备最大效能，在规定的反馈时间基础上，进一步缩短核酸检测结果报告时间。”即要做到在增加核酸检测量并缩短出报告结果时间的同时，加强质量控制，保证检测结果准确可靠，使核酸检测既保“量”又保“质”，为做好常态化疫情防控工作提供有力技术支撑。



卫健委关于新冠核酸检测质量控制的要求



疫情以来，卫健委发布了系列加强实验室的质量管理的通知：《关于加强外送样本新冠病毒核酸检测质量管理工作的通知》联防联控机制医疗发〔2020〕306号；《关于做好疫情常态化防控下新冠病毒核酸检测质量控制工作的通知》联防联控机制医疗发〔2020〕242号；《关于印发新冠病毒核酸筛查稀释混样检测技术指引的通知》联防联控机制医疗发〔2020〕277号；《关于印发医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册（试行）的通知》联防联控机制医疗发〔2020〕271 号。


由上级疾控部门对下级疾控实验室进行核酸检测质控 考核，中国疾控中心每年至少开展一次对省级疾控机构实验室的质控考核，并同时提供全国新冠病毒实验室检测质控方 案，省级针对地市级实验室的质控考核每年不少于2次。各检测机构应当加强核酸检测质量控制，选用扩增检测试剂盒 指定的核酸提取试剂和扩增仪。


1. 实验室要做好日常室内质控（IQC）
实验室可按照《国家卫生健康委办公厅关于 医疗机构开展新型冠状病毒核酸检测有关要求的通知》（国 卫办医函〔2020〕53号）要求规范开展室内质控。每批检测 至少有1 份弱阳性质控品（第三方质控品，通常为检出限的 1.5-3 倍）、3 份阴性质控品（生理盐水）。质控品随机放在 临床标本中，参与从提取到扩增的全过程。大规模人群筛查 时，一旦出现阳性结果，应对阳性标本采用另外一到两种更 为灵敏的核酸检测试剂对原始标本进行复核检测，复核阳性 方可报出。物品和环境样本的采集检测，还需在采样前及采样过程 中至少设一个现场空白样本及一个运输空白样本，以进行过程中的质量控制。



2. 实验室应对检测体系进行必要的性能验证(PT)
临床标本检测前，实验室应对核酸提取试剂、 提取仪、扩增试剂、扩增仪等组成的检测系统进行必要的性 能验证，性能指标包括但不限于精密度（至少要有重复性） 和最低检测限。建议选用高灵敏的试剂（检测限≤500拷贝 /mL）



3. 应常态化接受国家级或省级检验室间质量控制（EQA）
实验室应常态化参加国家级或省级疾控机构 组织的室间质评。对检测量大以及承担重点人群筛查等任务 的实验室，可适当增加室间质评频率。不按要求参加室间质 评的，或室间质评结果不合格的，应通报批评并上报国家卫 健委，待室间质评通过后方可开展核酸检测。




新型冠状病毒（SARS-CoV-2）核酸第三方质控品及标准物质在质量控制中的应用



1.国内外第三方质控品及标准物质现况

如下表：






2.有证国家二级标准物质在临床中的应用。

我国按照《计量法》和《标准物质管理办法》的规定，将标准物质作为计量器具施行法制管理。国家市场监督管理总局 对标准物质的申报、技术审查、定级、批准发布都作出了明确的、严格的规定。经批准的标准物质定级证书。新型冠状病毒核酸标准物质主要用途：

  • 量值传递；

  • 校准、测试仪器；

  • 性能评价和控制测试方法；

  • 室内质量控制；

  • 室间质量控制。





新冠病毒核酸检测实验室的质量控制




质量控制离不开标准物质和质控品，高质量的新型冠状病毒（SARS-CoV-2）核酸标准物质和第三方质控品的选择尤其重要。


1.新型冠状病毒（SARS-CoV-2）核酸质控物的选择原则。
（1）首选有证国家标准物质；
（2）无有证国家标准物质时，可以选择具有可溯源性的第三方质控品作为质控品；
（3）应使用独立、客观的第三方质控品，即不专为某特定方法或仪器设定或使其最佳化、其性能与试剂或试剂盒批号完全无关、可以对检测系统提供无偏倚评估的控制品；
（4）新型冠状病毒（SARS-CoV-2）核酸质控物首选全序列的假病毒，质控品应参与核酸提取，全过程的质量控制。适用不同检测平台、不同检测方法学、适用所有厂家试剂盒，包括FQ-PCR、RNA捕获探针法、测序法等方法学；
（5）量值可溯源性。量值可溯源性的质控品，如用数字PCR定值，并具有可溯源性；
（6）基质：无基质效应，与临床样本互通性好；
（7）安全性：灭活或无传染性；
（8）首选液态质控物，减少复溶引起不确定；
（9）稳定性、均一性良好；
（10）每批次检测时，应当随机放入至少1份弱阳性（1.5-3倍检测限）和3份阴性室内质控样本，进行质量控制，以及时发现问题，避免假阴性和假阳性；
（11）室间质评物的阴性质控品应设计有特异性参考品，特异性参考品如：SRAS RNA、MERS RNA、人冠状病毒（HCoV RNA）、流感病毒等分析物。



2.新型冠状病毒（SARS-CoV-2）核酸标准物质及第三方质控品在临床检测实验室质量控制中的应用
示例1：有证国家二级标准物质

注：新型冠状病毒核酸标准物质可用于量值传递；校准、测试仪器；性能评价和控制测试方法；室内质量控制；室间质量控制。
研制单位：广州邦德盛生物科技有限公司


示例2：室内质控品（IQC）


注：第三方质控品，含ORF1ab、N、E、S、M全序列基因，数字PCR法定值，量值可溯源至GBW(E)091132、GBW(E)091133新型冠状病毒（SARS-CoV-2）假病毒核酸标准物质。适用不同检测平台、不同检测方法学、适用所有厂家试剂盒，包括FQ-PCR、RNA捕获探针法、测序法等方法学。
研制单位：广州邦德盛生物科技有限公司



示例3：新型冠状病毒（SARS-CoV-2）核酸检测 室间质评物（EQA）

注：第三方质控品，含ORF1ab、N、E、S、M全序列基因，数字PCR法定值，量值可溯源至GBW(E)091132、GBW(E)091133新型冠状病毒（SARS-CoV-2）假病毒核酸标准物质。适用不同检测平台、不同检测方法学、适用所有厂家试剂盒，包括FQ-PCR、RNA捕获探针法、测序法等方法学。
1.阴阳性均含人内参P基因
2.阴性质控品同时设计了特异性参考品，用数字PCR法进行定值，适用所有厂家的试剂盒。
研制单位：广州邦德盛生物科技有限公司



示例4：新型冠状病毒（SARS-CoV-2）核酸检测 性能验证参考品（PT）

研制单位：广州邦德盛生物科技有限公司


1.性能验证条件：
(1)年度性能验证：对所开展的检验项目的分析性能及/或方法学至少每年进行一次评价。
(2)新安装的仪器：新仪器拟开展的项目必须进行分析性能和/或方法学评价。
(3)仪器故障维修后或更换主要的配件后：可能会对结果产生影响时，必须要对其所开展的检验项目进行分析性能评价。
(4)仪器校准后：必须要对其所开展的检验项目进行分析性能及/或方法学评价。
(5)新开展的项目：必须进行分析性能及/或方法学评价。
(6)试剂变更厂家：进行分析性能及/或方法学评价。


2.评价要求：
操作者应先熟悉仪器设备及操作过程。应对检验方法的熟练包括：标本、试剂的处理和贮存、正确的实验步骤、合理地解释结果及检测系统的质量控制。维持仪器的可靠和稳定。对仪器全面维护，必要时更换新的零部件。系统地检测仪器性能，确认达到要求。检测方法和/或仪器近期的室内质控和室间质评结果，确认达到要求。检测该仪器近期的校准记录，确认达到要求。


3.分析性能验证评价内容包括：
精密度、检测限、阳性符合率、特异性（阴性）符合率、抗干扰能力。


1.最低检测限验证
（1）用新型冠状病毒（SARS-CoV-2）核酸标准物质，梯度稀释于（与适用样本一致的）适当基质中，最低浓度水平附近制备若干梯度浓度样品，每个浓度梯度重复10次检测，以100%可检出的最低浓度水平作为估计检测限，将具有90%～95%阳性检出率的最低浓度水平作为确定的最低检测限。如试剂盒检测限是500copies/mL，可用2000copies/mL、1000copies/mL、500copies/mL、250copies/mL、125copies/mL梯度浓度样品检测验证最低检测限。

（2）选择不同来源的至少5个临床病毒样本（与最低检测限确定不同的病毒样本）在最低检测限浓度水平进行验证，应达到90%～ 95%阳性检出率。   
2.分析特异性验证
交叉反应验证（尽量采用真实病原体进行验证）
①地方性人类冠状病毒（HKU1，OC43，NL63和229E）、SARS冠状病 毒、MERS冠状病毒；（ SARS 、 MERS 如使用假病毒，请提供详细 的构建过程、序列信息） H1N1（新型甲型H1N1流感病毒（2009）、季节性H1N1流感病毒）、 H3N2、H5N1、H7N9，乙型流感Yamagata、Victoria，呼吸道合胞病 毒A、B型，副流感病毒1、2、3型，鼻病毒A、B、C组，腺病毒1、2、 3、4、5、7、55型，肠道病毒A、B、C、D组，人偏肺病毒、EB病毒、 麻疹病毒、人巨细胞病毒、轮状病毒、诺如病毒、腮腺炎病毒、水 痘-带状疱疹病毒；  肺炎支原体、肺炎衣原体；军团菌、百日咳杆菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球 菌、化脓性链球菌、肺炎克雷伯菌、结核分枝杆菌；烟曲霉、白色念珠菌、光滑念珠菌、新生隐球菌等。（提供详细的来源、鉴定方法）通常，细菌感染的浓度水平为106 cfu/mL或更高，病毒为105 pfu/mL或更高，提供所有用于交叉反应验证的病毒和细菌的来源、 种属/型别和浓度确认等试验资料。         
②含人类基因组DNA的阴性参考品。

3.精密度验证
精密度评价试验应包含核酸分离/纯化步骤。包括不同样本类型分别进行验证。模拟样本并不能体现临床样本可能带来的所有变异因素，因此精密度评价中应同时包含若干临床样本。用于精密度评价的人工模拟样品和临床样本均应至少包含3个水平：阴性样品、临界阳性样品、（中或强）阳性样品，并根据产品特性设定适当的精密度要求。
①阴性样本：待测物浓度低于最低检测限或为零浓度，阴性检出率应为100%（n≥20）。
②临界阳性样本：待测物浓度略高于试剂盒的最低检测限，阳性检出率应≥95%（n≥20）。
③中/强阳性样本：待测物浓度呈中度到强阳性，阳性检出率为100% 且CV≤10%（n≥20）。

4.阳性符合率/正确度验证
阳性符合率/正确度验证，用10份不同浓度（含弱阳、中、高浓度）、不同基因的阳性参考品，进行验证检测，阳性检出率应为100%。

5.内源/外源物质干扰验证
应根据所采集样本类型，针对可能存在的干扰情况进行验证。建议申请人在每种干扰物质的潜在最大浓度（“最差条件”）条件 下进行评价，在病毒临界阳性水平进行干扰试验验证。




【编辑】张皓宇
【审核】李尔华、谭杰秋
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广州邦德盛生物科技有限公司（Guangzhou BDS Biological Technology Co., Ltd.）成立于2015年，为国家高新技术企业和生物计量标准物质研究领先企业。公司以标准为引领，产业转化为先导，打造医疗器械全产业链创新平台为宗旨，致力于为生物医药企业提供一站式全产业链创新服务平台及标准化研究平台。
医疗器械全产业链创新服务中心：致力于为生物医药企业提供全方位、一站式科研项目策划与管理、质量管理体系建立与咨询、临床试验及统计学分析、国内和国际产品注册、受托研发和受托生产等服务。
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